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組織和細(xì)胞的固定方法

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2013-08-28  來(lái)源:實(shí)驗(yàn)室資訊網(wǎng)
核心提示:組織和細(xì)胞的固定方法固定 的目的是用人為的方法盡可能使組織細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)和化學(xué)成分保持生活狀態(tài),防止組織細(xì)胞死后發(fā)生自溶和
 組織和細(xì)胞的固定方法 

固定 的目的是用人為的方法盡可能使組織細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)和化學(xué)成分保持生活狀態(tài),防止組織細(xì)胞死后發(fā)生自溶和組織腐敗。固定還能增加組織塊硬度,使其更容易切片,使不同的結(jié)構(gòu)更容易染色。

 
固定方法有物理固定和化學(xué)固定兩類,物理固定可采用空氣干燥(血涂片)、驟冷(在液氮中迅速冷凍)或微波固定等;化學(xué)固定有浸潤(rùn)法(immersion method)和灌流法(perfusion method)。灌流法適用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中對(duì)缺氧敏感的器官,如神經(jīng)系統(tǒng)和胃腸等取材。
 
一、浸潤(rùn)法
 
浸潤(rùn)法是組織化學(xué)和免疫 組織化學(xué)常用的固定方法,一次要處理許多組織樣品時(shí)也多用此法。
 
預(yù)先需估計(jì)固定劑的用量,并在取材前配好固定液,分裝于小容器內(nèi),在容器上標(biāo)記組別和取材時(shí)間。容器內(nèi)放人記錄組織類型的紙條,以便包埋時(shí)辨認(rèn)。固定液的用量應(yīng)是樣品的40倍,以保證組織充分固定。固定時(shí)間可根據(jù)所選固定液和組織類型而定。
 
若進(jìn)行酶組織化學(xué)染色,應(yīng)在4℃短時(shí)間固定,固定時(shí)間長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致酶活性減弱,甚至消失。
 
二、灌流固定法
 
此法是經(jīng)血管途徑,將固定液灌注到欲固定的器官內(nèi),使生活的細(xì)胞在原位及時(shí)迅速固定,取下組織之后再浸入相同的固定液內(nèi)繼續(xù)固定。
 
灌流固定時(shí)大動(dòng)物多采用輸液方式,將固定液從一側(cè)頸總動(dòng)脈或股動(dòng)脈輸入,從另一側(cè)切開(kāi)靜脈放血,輸入固定液與放血同時(shí)進(jìn)行。固定液的輸人量因個(gè)體不同而異,即500―2000ml不等。
 
小動(dòng)物多采用心臟主動(dòng)脈灌流,如大鼠和小鼠,在吸人 深度麻醉情況下,打開(kāi)胸腔,縱向切開(kāi)心包膜,并用紗線在動(dòng)脈弓下打一松結(jié),然后用靜脈輸液針從左心室向主動(dòng)脈方向刺人,針尖刺人后,隨即將紗線扎緊固定,勿使其移動(dòng),再將右心耳剪開(kāi)放血。在灌注固定液前,先用含抗凝劑的37℃生理鹽水灌流,沖洗血管內(nèi)的血液,防止血液凝固阻塞血管。抗凝劑常用肝素,劑量為40mg/L沖洗液。肝臟顏色由鮮紅變?yōu)闇\白色時(shí),即可灌流固定液,灌注速度為5~10ml/min,應(yīng)在30分鐘內(nèi)結(jié)束灌注并取材,而后將組織浸入相同的固定液中1~3小時(shí)。灌流固定對(duì)組織結(jié)構(gòu)和酶活性保存較好。
編輯:songjiajie2010

 
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