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細(xì)菌的芽胞染色

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2013-04-03  來源:實驗室資訊網(wǎng)
核心提示:(一)實驗?zāi)康模簩W(xué)習(xí)細(xì)菌的芽胞染色法  (二)實驗原理:細(xì)菌的芽胞具有厚而致密的壁,透性低,不易著色,若用一般染色法只能使菌
 (一)實驗?zāi)康模簩W(xué)習(xí)細(xì)菌的芽胞染色法
  (二)實驗原理:細(xì)菌的芽胞具有厚而致密的壁,透性低,不易著色,若用一般染色法只能使菌體著色而芽胞不著色(芽胞呈無色透明狀)。芽胞染色法就是根據(jù)芽胞既難以染色而一旦染上色后又難以脫色這一特點(diǎn)而設(shè)計的。所有的芽胞染色法都基于同一個原則:除了用著色力強(qiáng)的染料外,還需要加熱,以促進(jìn)芽胞著色。當(dāng)染芽胞時,菌體也會著色,然后水洗,芽胞染上的顏色難以滲出,而菌體會脫色。然后用對比度強(qiáng)的染料對菌體復(fù)染,使菌體和芽胞呈現(xiàn)出不同的顏色,因而能更明顯地襯托出芽胞,便于觀察。
  (三)實驗器材
  1.活材料:培養(yǎng)36小時的蘇云金桿菌(Bacillus thuringiensis)或者枯草桿菌(Bacillus subtilis)。
  2.染色液和試劑:5%孔雀綠水溶液、0.5%蕃紅水溶液[見附錄二(一)6、5]。
  3.器材:小試管(75mm×10mm)、燒杯(300mL)、滴管、玻片擱架、接種環(huán)、擦鏡紙、鑷子、顯微鏡等。
  (四)實驗方法
  1.改良的Schaeffer和Fulton氏染色法
  (1)制備菌液:加1—2滴無菌水于小試管中,用接種環(huán)從斜面上挑取2—3環(huán)的菌體于試管中并充分打勻,制成濃稠的菌液。
  (2)加染色液:加5%孔雀綠水溶液2—3滴于小試管中,用接種環(huán)攪拌使染料與菌液充分混合。
  (3)加熱:將此試管浸于沸水浴(燒杯),加熱15—20min。
  (4)涂片:用接種環(huán)從試管底部挑數(shù)環(huán)菌液于潔凈的載玻片上,做成涂面,晾干。
  (5)固定:將涂片通過酒精燈火焰3次。
  (6)脫色:用水洗直至流出的水中無孔雀綠顏色為止。
  (7)復(fù)染:加蕃紅水溶液染色5min后,傾去染色液,不用水洗,直接用吸水紙吸干。
  (8)鏡檢:先低倍,再高倍,最后用油鏡觀察。
  結(jié)果:芽胞呈綠色,芽胞囊和菌體為紅色。
  2.Schaeffer與Fulton氏染色法
  (1)涂片:按常規(guī)方法將待檢細(xì)菌制成一薄的涂片。
  (2)晾干固定:待涂片晾干后在酒精燈火焰上通過2—3次。
  (3)染色:
  ①加染色液:加5%孔雀綠水溶液于涂片處(染料以鋪滿涂片為度),然后將涂片放在銅板上,用酒精燈火焰加熱至染液冒蒸汽時開始計算時間,約維持15-20min。加熱過程中要隨時添加染色液,切勿讓標(biāo)本干涸。(加熱時溫度不能太高)。
 、谒矗捍F鋮s后 ,用水輕輕地沖洗,直至流出的水中無染色液為止。
 、蹚(fù)染:用蕃紅液染色5min。
  (4)水洗、晾干或吸干。
  (5)鏡檢:先低倍,再高倍,最后在油鏡下觀察芽胞和菌體的形態(tài)。。
  結(jié)果:芽胞呈綠色,菌體為紅色。
  (五)實驗作業(yè):
  繪出所用材料的芽胞和菌體的形態(tài)圖。
  (六)注意事項
  1.供芽胞染色用的菌種應(yīng)控制菌齡。
  2.改良法在節(jié)約染料、簡化操作及提高標(biāo)本質(zhì)量等方面都較常規(guī)涂片法優(yōu)越,可優(yōu)先使用。
  3.用改良法時,欲得到好的涂片,首先要制備濃稠的菌液,其次是從小試管中取染色的菌液時,應(yīng)先用接種環(huán)充分?jǐn)嚢瑁缓笤偬羧【,否則菌體沉于管底,涂片時菌體太少。
 
編輯:songjiajie2010

 
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關(guān)鍵詞: 芽孢染色
 

 
 
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