在微生物發(fā)酵中，也存在混菌發(fā)酵，但也是已知混菌，只要是研究就只允許生產(chǎn)菌種存在，不能因為混雜其他菌種而影響試驗結(jié)果或無法分析試驗結(jié)果。因此，對所需物品和材料滅菌，環(huán)境消殺非常重要。

下面一起學(xué)習(xí)一下既方便又實用的實驗室滅菌消毒方法。

二、微生物實驗室常用的滅菌方法

（一）干熱滅菌法

定義：顧名思義，在干燥高溫環(huán)境（如火焰或干熱空氣）條件進(jìn)行滅菌的技術(shù)，不需要加水等操作。

原理：干熱滅菌是在高溫條件下將微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。

分類：主要包括火焰滅菌法和干熱空氣滅菌法。

1.火焰滅菌法

滅菌方法：又叫灼燒法，直接用酒精燈火焰等灼燒器械或器皿的方法。

適用范圍：實驗室接種針、鑷子等金屬器械滅菌，三角瓶、培養(yǎng)皿和試管等瓶口的滅菌。

注意事項：使用過程中，注意冷卻時間，以免影響目標(biāo)菌種。

2. 干熱空氣滅菌法

滅菌條件：干熱空氣滅菌所需溫度更高（160-170℃），時間更長（1-2h），一般160℃、滅菌2h，但干熱滅菌溫度不能超過180℃，否則包器皿的紙或棉塞就會燒焦，甚至引起燃燒。

適用范圍：耐高溫的玻璃和金屬制品，不允許濕熱氣體穿透的油脂和耐高溫的粉末化學(xué)藥品。

優(yōu)點：無毒、不傷害環(huán)境、對金屬和鋒利的儀器無腐蝕性。

缺點：熱穿透速度慢、殺菌殺滅耗時、不適用于大多數(shù)材料。

注意事項：

使用過程中，物品不能擺放太擠，需要留出一定的空間，以免影響空氣流通；

物品不能靠壁，以免燒焦或起火。

（二）濕熱滅菌法

定義：跟干熱滅菌相對，它是一種利用高溫和濕潤條件滅菌的方法，主要使用高壓蒸汽、沸水或流通蒸汽進(jìn)行滅菌。主要指高壓蒸汽滅菌法，高壓蒸汽滅菌是最常用滅菌最徹底的滅菌方法。

滅菌條件：實驗室常用的滅菌方法。將待滅菌物品放入高壓蒸汽滅菌鍋中，通過加壓高溫蒸汽進(jìn)行滅菌，通常在121℃下保持20-30分鐘。根據(jù)不同的物品，選擇不同的滅菌溫度和滅菌時間。

優(yōu)點：蒸汽來源容易，操作費用低廉，無毒，滅菌徹底，不會留下任何化學(xué)殘留物，對環(huán)境無污染。

缺點：設(shè)備費用高，不能用于怕受潮的物料滅菌。

注意事項：

原理：將液體或氣體通過有微孔的濾膜過濾，使大于濾膜孔徑的細(xì)菌等微生物顆粒阻留，從而達(dá)到除菌的方法。

濾膜孔徑應(yīng)在0.22～0.45μm范圍內(nèi)或用更小的細(xì)菌濾膜，溶液通過濾膜后，細(xì)菌和孢子等因大于濾膜孔徑而被阻，并利用濾膜的吸附作用，阻止小于濾膜孔徑的細(xì)菌透過。

適用范圍：多用于遇熱易發(fā)生分解、變性而失效的試劑、酶液、血清、培養(yǎng)液等。

2. 巴氏消毒法

適用范圍：乳制品多采用巴氏消毒法，將需要滅菌的液體加熱至68℃左右，保持15-30min，以殺死其中的病原菌。

優(yōu)點：減少營養(yǎng)成分流失，保留食品風(fēng)味。

缺點：不能殺死所有細(xì)菌，滅菌不徹底。

3. 甲醛熏蒸法

原理：甲醛是一種無色易溶于水的有機(jī)化合物，具有刺激性氣味。它是一種傳統(tǒng)的滅菌劑，通過與微生物的蛋白質(zhì)、核酸等生物分子發(fā)生反應(yīng)，破壞其結(jié)構(gòu)和功能，從而殺死微生物。

適用范圍：實驗室環(huán)境消殺。

優(yōu)點：不受環(huán)境溫度、濕度和微生物種類等影響，因此被廣泛應(yīng)用于各種場所的消毒。

缺點：甲醛對眼睛、皮膚和呼吸系統(tǒng)等具有刺激作用。

注意事項：

甲醛蒸汽在遇到明火或高溫時會發(fā)生爆炸，需要避免火源。

利用紫外線燈進(jìn)行照射滅菌的方法。紫外線是一種低能量的電磁輻射，可以殺滅多種微生物。

滅菌方法：使用前打開紫外燈照射，時間為30min。使用時關(guān)閉紫外燈，通風(fēng)5-10min，再進(jìn)行操作。

原理：通過對微生物的核酸及蛋白質(zhì)等的破壞作用而使其滅活。

適應(yīng)范圍：適合于實驗室空氣、地面、操作臺面滅菌。

優(yōu)點：

紫外線消毒不會產(chǎn)生任何化學(xué)物質(zhì)，因此不會帶來環(huán)境污染；

紫外線消毒速度相對快；

紫外線消毒的效果非常好，可以殺滅包括細(xì)菌、病毒、真菌等多種病原體；

紫外線消毒設(shè)備相對簡單，安裝和維護(hù)成本較低。

缺點：

紫外線對光線的穿透力較弱，因此只能對表面的病原體進(jìn)行消毒，對于深層的病原體效果較差；

紫外線消毒存在死角，容易有消毒盲區(qū)；

紫外線消毒的效果受到多種因素的影響，例如溫度、濕度、水質(zhì)等，需要嚴(yán)格控制消毒環(huán)境。

注意事項：

操作過程中，要關(guān)閉紫外燈；

紫外線燈管壽命較短，紫外線消毒設(shè)備需要定期維護(hù)，以確保消毒效果。

5.臭氧法

原理：臭氧是一種強(qiáng)氧化劑，能夠氧化分解細(xì)菌內(nèi)部酶類，破壞他們的細(xì)胞器和DNA、RNA，作用于外膜的脂蛋白的內(nèi)部的脂多糖，使細(xì)菌發(fā)生通透性畸變而溶解死亡。